ارزیابی کمی آلکالوئیدهای گیاهان باززایی شده ی catharanthus roseus در شرایط in vitro در دو حالت طبیعی و ترانسژنیک با agrobacterium rhizogenes

پروانش یکی از مهمترین گیاهان داروئی و زینتی در جهان است. در این تحقیق بذرهای پروانش پس از استریل شدن، به منظور تولید گیاهچه در محیط پایه ی ms، کشت داده شدند. قطعات ناحیه ی هیپوکوتیل گیاهچه های تولید شده که 45-35 میلیمتر طول داشتند، برای ایجاد کالوس در محیط ms جامد که حاوی هورمون naa و ba بود، (در دو شرایط تاریکی و روشنایی) و محیط سوسپانسیون (برای بررسی روند تولید آلکالوئیدها) قرار داده شدند. پس از 8 هفته چون کالوس های محیط تاریکی رشد بیشتری را نشان دادند، در آزمایشات بعدی از آنها استفاده گردید و به 2 قسمت تقسیم شدند. قسمت نخست تحت عملیات استخراج آلکالوئید قرار گرفتند و قسمت دوم به منظور ترانسفورماسیون ژنتیکی و تولید ریشه های موئین در محیط کشت ½ ms مایع که حاوی کلونی هائی از باکتری اگروباکتریوم رایزوجنز کشت یافته در محیط lb بود، به مدت 30 دقیقه قرار گرفتند. سپس برای انجام فرایند انتقال ژن به مدت 48 ساعت در محیط ms جامد قرار داده شدند. پس از آن به منظور از بین رفتن باکتری ها، با محیط ½ ms مایع که حاوی آنتی بیوتیک سفاتوکسیم بود شسته شدند. به منظور باززایی و تولید ریشه های موئین، کالوس های تراریخت شده در محیط ½ ms جامد بدون هورمون، در شرایط تاریکی قرار داده شدند. شکل گیری ریشه های موئین 5 روز پس از ترانسفورماسیون کاملاً مشهود بود و پس از 60 روز ریشه هایی به طول 9-8 سانتی متر تولید شد. ریشه های موئین، از کالوس های ترانسژنیک جدا گردید و هر یک از آنها جداگانه تحت عملیات استخراج آلکالوئیدها قرار گرفتند. نتایج آنالیز hplc برای 3 آلکالوئید استخراجی نشان داد که میزان آلکالوئیدهای حاصل از ریشه های موئین25/58 %، کالوس های ترانسژنیک 82/58 % و کالوس های غیر ترانسژنیک 36/40 % بود و میزان آلکالوئیدهای ریشه های موئین20% بیشتر از گیاهان غیرترانسژنیک بود.